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[方法]1．将大肠杆菌TG1种到基本培养琼脂板，37℃过夜。2．将基本培养琼脂板上的大肠杆菌TGl再接种到含有15m12XTY培养基的100ml形瓶中。37℃振荡培养过夜。3．用5ml夜培养的TGl接...
1．用溶于PBS的2m1抗原（10—1000ug/m1）包被免疫管，室温过夜。碳酸盐缓冲液也可使用。2．用PBS洗涤试管3次，并用2％MPBS封闭非特异性结合位点，放在旋转的转台上，37℃l小时。3．...
1．使用厂商*的试剂盒对抗原进行*化。如果用DTT洗脱，可以采用NHS—SS*。2．用2％MPBS封闭1．5ml微量离心管，室温1小时；然后，弃去封闭缓冲液。3．在1个1．5ml微量离心管中，用2％M...
抗体基因的突变导人可以是随机的，也可以在特异性位点上。随机导人突变为简单，而且也不需要推测哪个位点是提高亲和力的佳突变位点。随机突变更接近体内的体细胞高突变过程。导人随机突变的一种常用方法是链改组。这...
抗体可以含有超过50个CDR残基。因此带来一个问题，就是选择哪个CDR区和哪个CDR残基进行突变。我们和其他小组的结果都显示：定位于VHCDR3和VLCDR3的靶向突变是用噬菌体展示提高亲和力的有效方...
利用含有目标受体的复杂混合物，对噬菌体展示肽文库进行筛选。这适用于许多令人感兴趣的生物体系，如血清、脑脊液及其他生物性体液和细胞或组织表面等。在此情况下，目标就是要鉴定出结合于特定受体分子或结合于一组...
在有偶合剂（couplingreagent）HATU（Sigma）和DMF（Sigma）的情况下，加入异硫氰酸荧光素I（fluoresceinisothiocyanateisomer1）（Sigma）...
如我们以前的论文所述，我们经常将后几轮筛选得到的序列转移到能与大肠杆菌麦芽糖结合蛋白（MBP）融合表达的载体中去。这样就能够通过ELISA反应进行检测（反应信号的强度通常与每个克隆所编码的肽段的亲和力...
成功的初级库筛选将会得到一个或更多的能与受体特异性结合的肽段。这些分离得到的肽段的亲和性一般为比较低的微摩尔级别，从而不能在基于细胞的实验下检测到信号。为了提高这些初始筛选到的肽段的亲和性，可以通过低...
1油的覆盖及反应体系的体积如果PCR仪不加热反应小管的管盖，你需要在反应混合物上覆盖密度小的矿物油以防止蒸发。在反应小管的管盖总是被加热到高于96℃的PCR仪中，可以不加矿物油进行PCR反应。油覆盖得...
包含有亿万个随机肽段序列的大容量数据库对多种蛋白靶分子是一个丰富的资源库，例如包含细胞因子和生长因子配体、蛋白酶抑制剂和离子门通道。大多数情况下，肽段的配体通过将固定的纯化后的蛋白在噬菌体展示文库里扫...
一、大约100年前，法国化学家维克多·格林尼亚发现，将一个镁原子同一个碳原子偶联在一起，会将额外的电子推向这个碳原子，使得它能够更容易同另外一个碳原子连接在一起。不过，科学家们发现，这样的方法在创造简...
以中科院院士、上海交通大学*微生物代谢重点实验室教授邓子新的研究团队与中科院微生物研究所合作，近在多氧霉素（又名多抗霉素，宝丽安等）生物合成机理研究领域获得突破，从多氧霉素生物合成全基因簇克隆并获得3...
有多种不同的方法可使抗原有效地结合到免疫亲和柱上。因为抗体是通过共价与微珠偶联，而不是在溶液中，抗体—微珠／抗原作用完成所需的时间比抗体和抗原二者以游离状态在溶液中所需的时间要长得多。因此，采用的方法...
特异性背景条带的产生是由于多克隆抗体血清中的杂抗体或是待测抗原和样品中其他成分，具有可被抗体识别的共同表位而产生的特异性交叉反应。后者在使用单克隆抗体时较普遍。非特异性扩散的背景主要是由于印迹膜封闭得...
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