经典三级视频在线观看 用可溶性*化抗原进行选择

1．使用厂商*的试剂盒对抗原进行*化。如果用DTT洗脱，可以采用NHS—SS*。
2．用2％MPBS封闭1．5ml微量离心管，室温1小时；然后，弃去封闭缓冲液。
3．在1个1．5ml微量离心管中，用2％MPBS封闭100ul链霉亲和素磁珠，室温1小时。封闭后，用磁性试管架将磁珠吸向一侧，收集磁珠。弃去缓冲液。
4，预先削减文库中结合链霉亲和素的抗体：在2％MPBS中将1012～1013个噬菌体（首轮选择时为1013个，其后选择为1012个）与100ul链霉亲和素磁珠孵育1小时，反应体积为lml。用磁性试管架将磁珠拉向一侧，收集噬菌体抗体并弃去磁珠。
5．在已封闭处理的试管中，加入lml预先削减的噬菌体抗体，再加入*化抗原（100～500nmol/L）。转台上转动，室温孵育1小时。
6．将已封闭的100ul链霉亲和素磁珠加入试管，并在转台上室温孵育15分钟。将试管放在磁架30秒。磁珠将移向磁铁。
7．抽吸试管，让磁珠留在微量离心管侧面。是用1个200ul吸头套在巴氏滴管上，再接到真空源上进行抽吸操作。用PBS/Tween洗涤磁珠7次（每次lml），接着用MPBS洗涤2次以及用PBS洗涤1次。每隔一次洗涤后，将磁珠转移至1个新的1．5m1试管内，将有助于有效洗涤。
8．加入lmll00mmol/L三乙基胺洗脱噬菌体，给试管加盖；并来回转动8分钟。用磁架将磁珠拉向一侧，并将溶液转移到1个含有500ul lmol/L Tris（pH 7．4）的Eppendorf管中。
9．继续进行步骤7前面的流程来准备次轮选择。根据洗脱的噬菌体滴度情况，次轮选择所用抗原浓度可以降低为原来的1/11。