上海金穗生物科技有限公司
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8 2013-3

scFv和载体DNA的连接

[器材和试剂]●T4DNA连接酶及10×缓冲液(NEB)●酚/氯仿(Sigma)●和70%乙醇,-20℃保存●消化的载体和scFv文库●TE(10mmol/LTrispH8,lmmol/LEDTA)[...

6 2013-3

自文库甘油储存料中制备噬菌体抗体

[方法]1.取适当数量(参见上述讨论)的甘油文库储存料接种到含有250m12×TY/amp/glu的2L培养锥形瓶中。培养基的A600值应小于0.05。从每个培养瓶中取1ul铺板确定起始接种物的细菌量...

6 2013-3

用氯化铯离心法纯化噬菌体

[器材和试剂]●L8—MBeckman超速离心机或与其相当的机型●吊桶式SWTi4l转头或相当类型●氯化铯(Sigma)●PBS●纯化的噬菌体样本[方法]1.在每毫升后的噬菌体悬液(例如来自实验方案1...

4 2013-3

用PCR识别不同的噬菌体抗体克隆

[方法]1.配制PCR“主混合液”,每克隆20ulPCR混合液,包含:●水,15.5ul●10XRT缓冲液,2.0ul●5mmol/LdNTP,1.0ul●5,引物,1.0ul●3,引物,1.0ul●...

4 2013-3

在微量滴定板中进行可溶性SCFv ElISA

[器材和试剂]●9E10单抗(SantaCruzBiotech)●PBS●PBS/0.1%Tween20(PBS/Tween)●4%MPBS●抗小鼠HRP标记抗体(例如Sigma目录号A2554)●含...

1 2013-3

构建轻链改组文库

为便于轻链改组,要在FHENl—Vλ3载体中构建轻链基因文库。此载体以pHEN1为基础并包含:pelB前导序列、1个NcoI克隆位点、1个多接头、1个编码VH框架4中2个C末端氨基酸的XhoI克隆位点...

1 2013-3

人VL基因文库的构建

[方法]1.配制4个独立的50ulPCR反应混合液,包含:●水,35.5ul●20XdNTP(每种5mmol/L),2.5ul●10XVent聚合酶缓冲液,5.0ul●FdSEQl引物(10pmol/...

27 2013-2

鞣酸—柠檬酸钠还原法制备胶体金分散颗粒

A液(80ml):1%氯化金,lml;双重蒸馏水,79ml。B液(20m1):1%柠檬酸钠,4ml;1%单宁酸,0.lml;双重蒸馏水,15.8ml。25mmol/LK2C03,0.1ml;将上述A液...

27 2013-2

制备胶体金分散颗粒的其他方法

乙醇—超声波还原法(Baigent和Muller,1980)(1)取1%AuCl3·HCl水溶液lml加入100ml双重蒸馏水。(2)用0.2m01/LK2C03调pH至7.2,再加入lml无水乙醇。...

25 2013-2

微量移液器基本使用方法

1)选择适当的Pipetman:不同型号的微量移液器,各有其吸取体积范围,请依取用溶液体积取用适当的微量移液器。P100.5~10P202~20P10020~100P20050~200P1000200...

25 2013-2

微量移液器的使用与准确度检测

药品试剂:Solution1Solution2方法步骤:1)请取六支微量离心管,分别标上A~F。2)以正确使用方法,依下表所列体积吸取不同溶液至各管中。单位ABCDEFSolution13008205...

22 2013-2

分光光度计之使用

吸光度测定方法1)打开右前方之电源开关。2)打开左后侧之UVLamp或VISLamp开关。3)输入波长:按「WAVE-LENGTH」键按数值键,例如:「2」「8」「0」按「ENTER」键4)选择MOD...

22 2013-2

细菌培养之单一菌落 (single colony)分离

药品试剂:E.coliK-12菌株(JM109)LBagarplates:1%(w/v)Bactotryptone,0.5%Bactoyeastextract,1%NaCl,以5NNaOH调至pH7....

20 2013-2

氯化钙法进行质体的转形

方法步骤:1)进行转形实验前16~20h,自-70℃取出贮存的菌种,以划单一菌落方式将菌株JM109接种在SOB固体培养基上,在37℃培养。2)取40mLSOB培养基装入125mL已灭过菌的三角瓶(请...

20 2013-2

电穿孔法进行质体的转形

方法步骤:菌体的处理:1)进行转形实验的前16~20h,将菌种JM109接种在SOB固体培养基上,并在37℃培养箱中培养。34MethodsinBiotechnologyVol12)取80mLSOB培...

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