极品白丝嫩模被大哥操 先导肽的优化策略

        成功的初级库筛选将会得到一个或更多的能与受体特异性结合的肽段。这些分离得到的肽段的亲和性一般为比较低的微摩尔级别，从而不能在基于细胞的实验下检测到信号。为了提高这些初始筛选到的肽段的亲和性，可以通过低价展示系统构建含有大量变异体的突变库。然后通过一系列的能获取高亲和力肽的方法来筛选这些库。

序列的突变可以通过很多的寡核苷酸合成策略达到。其中一种很典型的策略是使用70％的原始碱基和分别为10％的其余碱基的亚磷酰胺混合物合成密码子前两位，然后用等物质的量的G和T合成第三位。这种70；10：10：10的策略能够使序列靶点产生约50％的突变。突变率可以通过增加或减少原始和变异碱基的比例来调节。选择恰当的简并密码子模式也可以合成一系列的氨基酸。例如，需要检查某个位置半*是否必要，就可以合成编码为TST的序列，其中S代表等物质的量的G和C的混合物。这个简并密码子将会编码50：50比例混合的*和半*。一个序列中可以固定一些保守的氨基酸，而改变其两侧的氨基酸残基。额外的随机氨基酸残基也可以通过加入NNK密码子的方式加到肽段两端。以上这些策略在构建次级库的时候通常是联合使用的，以使其不同肽的数量与初级库随机肽的数量尽可能相同。

次级库筛选的难点在于从大量的变异体中筛选出与受体结合的亲和性有提高的克隆。使用低价展示系统可以降低筛选得到与固化受体有多价结合作用的噬菌体的可能性。我们实验室使用与pⅧ噬菌粒库相似的pⅢ噬菌粒库来实现这个目的。下文中所描述的冠状二聚体系统在发现高亲和力肽段中被证明更为有效。

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