为了避免戴安高效液相色谱仪的常见操作失误,操作人员需要遵循一系列规范的操作步骤和维护措施。以下是一些具体的建议:
一、流动相的处理
1.过滤:应预先除去流动相中的任何固体微粒,可采用Millipore滤膜(0.2μm或0.45μm)等滤器进行过滤。泵的入口都应连接砂滤棒(或片),输液泵的滤器应经常清洗或更换。
2.脱气:防止流动相中的气泡对系统造成不良影响,确保流动相的稳定性。
二、泵的维护
1.及时清洗:在停泵过夜或更长时间的情况下,必须泵入纯水将泵充分清洗后,再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂(对于反相键合硅胶固定相,可以是甲醇或甲醇-水)。流动相不应含有任何腐蚀性物质,含有缓冲液的流动相不应保留在泵内。
2.防止空转:泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完,避免空泵运转磨损柱塞、缸体或密封环。
三、梯度洗脱的注意事项
1.溶剂互溶性:注意溶剂的互溶性,不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶,超出范围后就不互溶,使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时,还可能析出盐的晶体,尤其使用磷酸盐时需特别小心。
2.空白梯度洗脱:进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱,以辨认溶剂杂质峰。
3.粘度变化:混合溶剂的粘度常随组成而变化,在梯度洗脱时需注意压力的变化,防止超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。
四、六通阀的使用和维护
1.样品过滤:样品溶液进样前必须用0.45μm滤膜过滤,以减少微粒对进样阀的磨损。
2.阀芯转动:转动阀芯时不能太慢,更不能停留在中间位置,防止流动相受阻、泵内压力剧增甚至损坏柱头。
3.冲洗进样阀:为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中,每次分析结束后应冲洗进样阀。

五、色谱柱的使用和维护
1.避免反冲:色谱柱一般不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。
2.预柱和保护柱:选择使用适宜的流动相(尤其是pH值),以避免固定相被破坏。可以在进样器前面连接一预柱或保护柱,以保护分析柱。
3.调节流速:调节流速时应缓慢进行,避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
六、仪器的校准和日常维护
1.定期校准:为了确保戴安高效液相色谱仪的稳定性和准确性,应定期进行仪器校准,确保各项参数在规定范围内。
2.日常维护:包括流动相的过滤、脱气、泵密封垫的清洗、系统管路的清洗等,应坚持进行,以防止色谱柱堵塞、系统压力过大、色谱峰异常等故障的发生。
七、样品制备的注意事项
1.浓度:样品的浓度应适中,避免过高或过低影响分离效果。
2.溶剂:应使用与液相色谱仪兼容的溶剂进行样品溶解和稀释。
3.过滤:样品溶液应经过适当的过滤处理,以去除可能影响分离效果的杂质。
避免戴安高效液相色谱仪的常见操作失误需要从流动相处理、泵维护、梯度洗脱、六通阀使用和维护、色谱柱使用和维护、仪器校准和日常维护以及样品制备等多个方面入手。操作人员应严格遵循操作规程和保养要求,确保实验结果的准确性和仪器的长期稳定运行。