大鼠精原干细胞 返回列表页

实验操作步骤：  

a．采用认可的方案处死啮齿动物。

b．立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。

c．用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。

d．用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。

e．剔除胚胎周围的包膜，将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。

产品属性：

产品介绍：

名称    大鼠精原干细胞

2.组织来源：睾丸组织

3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

大鼠精原干细胞分离自睾丸组织；精原干细胞是位于睾丸生精小管的生精上皮内的一群生精干细胞，是成体内的定向干细胞。精原干细胞的一些*优势使其成为动物转基因的理想宿主细胞。精原干细胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多项生命活动的调节机制的深入研究，精子发生机理的进一步阐明以及精原干细胞转染，异体、异种移植技术的实际应用，都迫切需要找到一种可行的方法将其分离纯化，以期得到较高产量和纯度的有活力的精原细胞用于体外培养。在哺乳动睾丸内，精子发生时一个受高度调控和持续的过程，精原干细胞（SSCs）一方面进行自我更新维持干细胞数量，另一方面又不断执行分化成各级生精细胞直至最后生成精子。精原干细胞定居在曲精细管上皮的基膜处，是哺乳动物精子发生的最原始细胞，也是动物体内一起能将遗传信息传递的干细胞。精原干细胞体外培养体系的建立，在生物学、医学、畜牧业生产及制备转基因动物等领域具有广阔的应用前景。精原干细胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群细胞，具有自我更新能力和多向分化潜能，是哺乳动物体内能将遗传信息传递给下一代的成体干细胞。

5.方法简介：

()实验室分离的大鼠精原干细胞采用先机械吹打、后消化，结合Percoll密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测：

()实验室分离的大鼠精原干细胞经CD44免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

产品货号CM-R171

换液频率每2-3天换液一次

生长特性悬浮

细胞形态球形

传代特性可传3代左右

消化液0.25%

培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

处理方法：

收到细胞后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。如有破损漏液等问题，请即时联系。并进行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

2. 将细胞放入37度培养箱中预温3-4小时后再做处理，以稳定细胞状态。

3. 预热培养基（含10%胎牛血清，1%双抗）。

4. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）。

5. ①若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。放到37度培养箱培养。待细胞密度达到80%以上，进行传代。

注意事项：

1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，

避免开盖时试剂损失。

3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗

并*清除残留清洁剂。

6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

细胞培养的优点：

1.研究的对象是活细胞

在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。

2.研究条件可以人为控制

pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。

3.研究的样本可以达到比较均一性

通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。

4.研究内容便于观察、检测和记录

采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备

记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。

5.研究的范围比较广泛

应用的学科领域较为宽广，如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等；

适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。

6.研究的费用相对较经济

可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。

1次 一步法96孔板质粒DNAout（真空法）  

2 ug pET-44a(+) pET-44a(+) 低温运输，-20℃保存

钠氏试剂  5ML*2

1瓶 A7d细胞株 A7d 低温运输和保存

营养琼脂（NA）颗粒 Nutrient Agar 250g

50次 甲基化专一性PCR试剂盒 Methylation Specific PCR Kit 常温保存（PCR MagicMix 2.0需要-20℃保存）

100mL MOPS Buffer,0.5M,pH9.0   MOPS Buffer,0.5M,p얾嵌쐛L⪀

大鼠精原干细胞HIFPH4  缺氧诱导因子脯氨酰4羟化抗体 规格: 0.2ml

强化梭菌鉴别琼脂（DRCA） Differentia Reinforced Clostridial Agar 250g

ENC1/KLHL35  外胚层神经皮层蛋白1抗体 规格: 0.2ml

1个 15mLDNA超滤离心管(150-250KD)  

SORBS2/ArgBP2  氨酸结合蛋白2抗体 规格: 0.2mlPhospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244)  磷酸化S6核糖体蛋白抗体 规格: 0.1ml

1g 亚精胺 ( 精脒 )  4℃保存

S100A10  S100钙结合蛋白A10抗体 规格: 0.2ml

Shiga-like toxin IIe variant subunit A  大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型突变体（O139菌型）抗体 规格: 0.2ml

TASK 3/KCNK9  酸敏性钾离子通道蛋白抗体 0.2ml

1mg 碱性 ( 牛小肠 ) Phosphatase Alkaline（Calf Intestine） -20℃保存

500mL Blotto in PBS  Blotto in PBS  常温保存

100mL 核酸印迹膜染液 Nucleic Acid Membrane Stain 常温