elisa定量检测试剂盒生物素或亲和素与抗体分子或标记物结合后,既不影响前者的亲和力,也不改变后者的特性。亲和素分子的4个活性部位并非都和连接在抗体分子上的生物素残基结合,剩下的游离部位尚可作为另一种生物素标记蛋白质的受体。这些特点就是BAS免疫标记技术的基础和原理。
ELISA试剂盒BAS基本检测方法可分为两大类,一类以游离亲和素居中,分别连接生物素化大分子反应体系和标记生物素,称为BAB法或桥联亲和素生物素法(bridged avidin biotintechnique,BRAB),其改良法称为(avidinbiotin complex,ABC)法。另一类以标记亲和素连接生物素化大分子反应体系,称为BA法或标记亲和素和生物素法(LAB)。现分别介绍如下:
1.BA法亦称LBA法。系将特异性抗体生物素化,将酶分子标记在亲和素分子上,生物素化抗体与被检抗原结合后,再借BAS的高度亲和力将酶分子联结到抗原分子上,经酶促反应即可检出抗原。
2.BAB法亦称BRAB法。系将特异性抗体生物素化,将酶分子标在生物素上,然后以游离亲和素桥联物,使被检抗原、生物素化抗体和酶标生物素联成一体。
3.ABC法原理与BAB法基本相同,只是亲和素和酶标生物素需要先按一定比例形成ABC复合物,这种网络结构结合了大量的酶分子,当亲和素尚未被酶标生物素饱和时,生物素化抗体即可与之结合。BASELISA的三种基本检测法。
ELISA试剂盒上述方法中,如将第二抗体生物素化,即为间接法。由于间接法增加了一级抗原抗体反应,因而比直接法更敏感,应用范围更广。近年来许多学者对上述基本方法进行了改良,有人用亲和素抗体或A蛋白作桥联物。另外还发展了elisa定量检测试剂盒竞争法和抑制法等。
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