肺炎支原体PCR检测试剂盒样品活化方法:
生物样品中的通常以无活性的形式存在,在检测指标活性前必须进行活化处理。
活化方法如下:
血清、血浆: 280 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
注意:样品被稀释了10倍!
细胞培养上清:20 μL标准品&样品稀释液中加入100 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
注意:样品被稀释了2倍!
组织匀浆:1960 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品,混匀后检测。
注意:样品被稀释了50倍!
试验所需自备物品
1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
3. 37℃恒温箱,双蒸水或去离子水
4. 吸水纸
ELISA实验中给检测样本加样的步骤详解
1.细胞上清:前处理必须是细胞离心去除,每孔直接加100p1即可。如果浓度太高需稀释时,用标准品稀释液直接稀释。
2.脑脊液:前处理必须是细胞离心去除,每孔直接加100W1即可。如果浓度太高需稀释时,用标准品稀释液直接稀释。
3.血清血浆:加入50u山样本分析緩冲液后加50u标本如稀释量大,请将样本与样本分析緩神液等量加入,不足部分用标准品稀释液补充至100u。
①血清标本应是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液。
②血浆标本,推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检測,标本收集后请分装冻存于-20℃,避免反复冻融。
③血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂。
④标本应清澈透明,检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
⑤请勿使用溶血,高血脂或污染的标本检测,否则结果将不准确。
4.组织匀浆液的样本:要制备过程中需要在缓冲液中加入蛋白酶抑制剂,防止蛋白成份被内源性蛋白酧降解,造成检测结果的值偏低。因组织匀浆液的样本蛋白种类多,含量丰富,验参照血清血浆标本的处理方法进行,否则就会影响实验结果。具体是加入50u样本分析緩冲液后加50u标本,需稀释时,请将样本与样本分析緩神液等量加入,不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
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