目的是洗去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯待塑料对蛋白质的吸附作用是普遍性的。因此在鸡ELISA试剂盒测定的反应过程中应尽量避免非特异性吸附，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。在标本和结合物的稀释液和洗涤液中加入聚山梨酯（吐温，Tween）一类物质即右达到此目的。使用前应观察是否变质。蒸馏水的质量在ELISA试剂盒中也至关重要，使用新鲜重蒸馏的。不合格的蒸馏水可使空白值升高。
测定的实施中，应力求各个步骤操作的标准化，下面以板式ELISA试剂盒为例。
鸡ELISA试剂盒介绍有关注意事项
1. 用方阵法滴定选择各反应物zui适工作浓度；
2. 将100μlRAMIG溶液包被聚苯乙烯反应板微孔，4℃湿盒，12h；
3. 弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗涤3次，甩干；
4. 加入100μl抗激素Mab溶液，37℃70min；
5. 弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗涤3次，甩干；
6. 各孔内依次加入50μl待测样液，每个样品3次重复，15～20℃，20min；
7. 加入50μlHRP标记激素，37℃，60min；
8. 弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗涤3次，甩干；
其结果可用目测或用分光光度计定量测定，鸡ELISA试剂盒本法用不同种抗原包被固相载体后，只要用一种酶标记抗人球蛋白，即可作多种人的传染病、寄生虫病以及其他疾病的血清学诊断。如用酶标记抗人IgM,则可用于早期诊断。
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