经典AV三级在线观看 免疫ELISA试剂盒双歧杆菌

        ELISA试剂盒的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，根据酶反应底物显色的深浅进行定性或定量分析。目前所报道的相关研究中，都未能对利用双抗夹心ELISA方法检测双歧杆菌的反应前提进行建立并且没有对双歧杆菌进行定量检测的研究。在所有以抗原抗体反应为基础的检测方法中，酶联免疫吸附法是目前发展zui为迅速并且较为完善的检测方法。近年来跟着免疫学的不断发展以及血清学技术的应用，对双歧杆菌的鉴定和检测已从传统的平板计数方法发展到应用以抗原抗体反应为基础的各种酶免疫检测方法。ELISA方法克服了传统平板计数法的繁琐及分子生物学检测方法的用度昂贵等缺点，如能开发出其检测双歧杆菌的试剂盒将对实际应用将具有重要意义。因为利用了酶的率催化反应，间接放大了免疫反应的结果，使测定具有*的敏捷度。
具体研究结果如下:
1.制备出的兔抗长双歧杆菌免疫血清效价可达1:20480;鼠抗长双歧杆菌免疫血清效价达1:10240,均具有较高的效价。
2.通过对双抗夹心ELISA检测方法中各反应条件进行摸索和比较,确定*反应条件为：*包被抗体和二抗反应浓度分别为1:160和1:5120；选用NBS和1%BSA-PBS分别作为包被缓冲液和封闭缓冲液;封闭30min;酶标抗体作1:2000的稀释之后作用90min;zui后底物反应时间为20min;并且绘制了此方法检测双歧杆菌的标准曲线，得出了标准曲线方程:y=0.4461x-2.1503,相关系数为R2=0.9881。
3. ELISA试剂盒的组装要组分有:兔抗长双歧杆菌免疫血清包被并封闭的8×12孔酶标板;工作浓度鼠抗长双歧杆菌免疫血清;工作浓度酶标抗体;长双歧杆菌标准品;底物溶液;终止液;浓缩洗涤液;操作方法及说明。
4.ELISA试剂盒的方法学评价对所组建的双抗夹心ELISA检测双歧杆菌的试剂盒进行了方法学评价,包括:特异性、重复性、灵敏度。对分别含有4种不同双歧杆菌和七种不含双歧杆菌的样品进行检测,非双歧杆菌属微生物对检测结果没有影响,说明此方法具有较强的特异性;用五种不同样品对板间及板内分别做了重复性实验,仅有很好的几分样品变异系数超过10%,说明此试剂盒具有良好的重复性;对双歧杆菌的zui低检出限为106cfu/mL;
5.ELISA试剂盒的保存期实验通过对包被酶标板的保质期进行测定,实验证明,此试剂盒能在4℃的条件下保存一年以上;
6.采用所组建的双歧杆菌双抗夹心ELISA试剂盒对市售双歧杆菌的酸奶、奶粉及自制双歧杆菌乳粉进行检测与平板计数法相比。