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对于ELISA试剂盒客户来说,在实验中可能用到不同的样本,如何辨别所购的试剂盒能否测手中的样本呢?
对于zui常见的细胞上清,我们大家知道,培养细胞过程中,无特别情况一般是10%的牛血清加入培养基中,经过培养后,细胞的吸收消耗,zui后细胞上清中蛋白含量会很少,而且对于一般牛血清生产的厂家来说,在生产过程中已经去除了大部分对检测有干扰的物质,所以对一般ELISA而言,不会影响抗体抗原的结合。
血清是zui常用的ELISA试剂盒标本之一,ELISA检测中血浆一般可视为与血清同等的标本,标本中干扰性物质是引起检测后结果偏高或偏低的主要原因,干扰性物质分为内源性物质和外源性物质两大类:
1.内源性物质
常见的干扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。
(1)类风湿因子 :血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)在ELISA检测中,可与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合,从而导致检测OD值偏高。
(2)补体 : ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中,抗体分子发生变构,其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来,使C1q 可以将二者连接起来,从而造成检测OD值偏高。
人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体,可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来,也能造成检测OD值偏高。
此外血清中嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质及血清中脂质过高、*、血红蛋白及血液粘度过大等,均对ELISA测定结果有干扰作用。
外源性物质常常是由于用于ELISA试剂盒测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集 不全和*中添加物等影响。由于各种人为原因引起的标本溶血,均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的标本受细菌污染 :因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶,因此,被细菌污染的标本同溶血标本一样,亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。
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