极品白丝嫩模被大哥操 gⅥ-cDNA噬菌粒文库的获取和纯化

 [方法]
A．噬菌体颗粒文库的获取
1．在lOOml的摇瓶中加50ul的甘油菌（8X108个细胞）到20m1的LBAT，在37℃振荡（260r/min）培养2～3小时（或OD600nm达到0．5～0．7）。
2．在感染多样性为10：1的条件下加R408辅助噬菌体。
3．在37℃无振荡条件下温育细胞30分钟。
4．将已感染细胞转移到加有lOOml预加热的LBAT的1 L摇瓶中。
5，在30℃振荡（260 r/min）条件下过夜培养。
B．噬菌体颗粒文库的纯化
1．将培养物转移到50ml聚乙烯管中，并在4℃3500g条件下离心30分钟。
2．用0．45um过滤器滤除上清液（用一个新的聚乙烯管），并加1/5体积的PEG/NaCl。
3．混合均匀，在冰浴中培养1小时。
4．在4℃，3500g的条件下离心20分钟，除去上清液然后在4℃，4000g的条件下离心3分钟，后尽量除去上清液。
5．在0．5ml的PBS和5％（体积分数）的无菌甘油中打散沉淀，再一起转移到一个新的微离心管中。
6．在14000g微离心机中旋转以除去细胞碎片，将上清液转移到一新的微离心管中。
7．通过检测260nm的吸收值来计算噬菌体的浓度，一吸收单位相当于4.4×1013个噬菌体转化单位。
8．为了储存在新的微离心管中将噬菌体均等分为250ul，在-20℃冷冻并储存。