极品白丝嫩模被大哥操 再扩增scFv基因文库以添加限制性位点进行克隆

[器材和试剂]
● PCR试剂和设备。除了用Taq聚合酶缓冲液替代Vent聚合酶缓冲液。各自在适宜缓冲液中保存的Tdg聚合酶，均可使用。
● V区特异性正向 （3’）（JκFORNot和JλFORNot）和反向（5’） （VHBACKSfi PCR引物
● 已组装的scFv基因文库
● Wizard PCR纯化试剂盒（Promega）

[方法]
1．在0．5ml微量离心管中，配制两个50/z1PCR反应混合液（1个用于VH—VκscFv文库， 另1个用于Vu—Vλ scFv文库），其中含有：
● 水，36．5//1
● 10XTag缓冲液，5．0ul
● 20XdNTP， 2．5ul
● 正向引物，2．0ul
● 反向引物，2．0ul
● scFv基因文库（约long）， 1．0ul
2．在热循环仪格内加热反应管到94℃，5分钟。如果没有加热盖，则滴加1滴轻质矿物油覆盖反应液。
3．加入1．0ul（5单位）TdQDNA聚合酶。
4．以94℃ 1分钟、55℃ 1分钟、72℃ 1分钟的条件共循环25次，扩增scFv基因。
5．用Wizard PCR纯化试剂盒，纯化PCR产物。