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经典三级视频在线观看 细胞冻存时的注意事项

时间:2022/4/19阅读:788
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经典三级视频在线观看 细胞冻存时的注意事项:

1. 在冷冻保存之前,应观察细胞生长是否良好(log phase) 且存活率高,冻存的细胞密度为80 – 90 %最佳

2. 冷冻前检测细胞是否保有其*性质,例如是否有杂细胞或者支原体等。

3. 使用的DMSO 应为试剂级等级,以5~10 ml 小体积分装,4 度避光保存,勿作多次解冻。使用的甘油也应为试剂级等级,以高压蒸汽

灭菌后避光保存。在开启后一年内使用,因长期储存后对细胞会有毒性。

4. 冷冻保存的细胞浓度:

4-1. 正常的成纤维细胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2.杂交瘤细胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,细胞浓度不要太高,某些杂交瘤会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后si 去。

4-3.贴壁肿瘤细胞: 1 x 10^6,依细胞种类而异。腺癌类的细胞解冻后须较高之浓度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 悬浮细胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴类细胞须至少5 x 10^6 cells/ml。

5. 冷冻保护剂浓度为5 %或10 % DMSO,若是不确定细胞之冷冻条件,在做冷冻保存之同时,亦应作一个backup culture,以防止冷冻失败。


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