骨骼肌细胞的贴壁速度比非肌源性细胞慢,为此,可以用差速贴壁法取得较高纯度的肌源性细胞。具体办法是:
1.取原代培育早期的细胞(培育30~40h),经洗刷后,用0.25%的胰蛋白酶溶液消化。细胞开端脱壁时以马血清停止消化。
2.搜集脱壁的细胞,洗刷后用培育液制备成细胞悬液。
3.当即接种到另一培育板上,贴壁40min。此时,大都非肌源性细胞现已贴壁,而骨骼肌细胞仍悬浮在培育液中,或沉降到培育板上但未贴壁。
4.吸出未贴壁细胞,计数后将细胞调至所需细胞浓度,进行接种。
5.接种后,骨骼肌细胞纯度可到达90%以上。该办法亦可用于直接经胰蛋白酶溶液消化的肌肉组织细胞。